土雞蛋，是不少消費(fèi)者非常推崇的雞蛋種類之一。而在挑選土雞蛋的時(shí)候，消費(fèi)者往往有這樣的經(jīng)驗(yàn)——蛋殼越紅，品質(zhì)越高。其實(shí)，雞蛋蛋殼和蛋黃的顏色，來(lái)源于母雞飼料中的類胡蘿卜素物質(zhì)，這類物質(zhì)含量越高，雞蛋的顏色越紅。因此，有不少養(yǎng)殖戶選擇添加類胡蘿卜素物質(zhì)來(lái)改善雞蛋的顏色。

       “斑蝥黃”就是其中一種，又名角黃素，是一種天然存在于甲殼、魚類、藻類等生物體內(nèi)的類胡蘿卜素。它是一種橙紅色的色素，穩(wěn)定性比較好，常用于飲料、醬料、肉類等食物的

       調(diào)色，可讓蛋黃顏色更鮮紅，讓動(dòng)物肉的色澤更紅潤(rùn)。

       在目前的相關(guān)國(guó)標(biāo)中，對(duì)于斑蝥黃的添加和使用進(jìn)行了規(guī)定，《飼料添加劑安全使用規(guī)范》中明文規(guī)定，斑蝥黃可以作為著色劑被生產(chǎn)需要適量用于家禽，在肉禽配合飼料和蛋禽配合飼料中的限量為25mg/kg、8mg/kg。國(guó)標(biāo)中也提供了兩種檢測(cè)方法——LC-UV和LC-MS/MS。本文就介紹了一種更高效的LC-MS/MS的方法，即使用Waters ACQUITY UPLC接Quattro Premier XE質(zhì)譜實(shí)現(xiàn)LC-MS/MS的方法。

       樣品處理方法參照SN/T 2327-2009執(zhí)行，使用液液萃取凈化，同時(shí)結(jié)合Xevo TQ-S Micro的高靈敏度，使用了溶劑稀釋方法，避免了標(biāo)準(zhǔn)當(dāng)中長(zhǎng)時(shí)間的濃縮過程帶來(lái)的回收率損失。ACQUITY UPLC I-Class建立高效的分離方法，斑蝥黃反式、順式異構(gòu)體的保留時(shí)間分別約為2.60min、2.89min，標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖見圖1,檢測(cè)結(jié)果采用基質(zhì)匹配外標(biāo)法定量，分析雞蛋中的斑蝥黃。測(cè)試了系統(tǒng)重現(xiàn)性和樣品加標(biāo)回收率，并對(duì)實(shí)際樣品中的斑蝥黃含量進(jìn)行檢測(cè)。

       實(shí)驗(yàn)方法

       超高效液相色譜分離條件

       色譜系統(tǒng): ACQUITY UPLC I-Class

       色譜柱: ACQUITY UPLC BEH C18， 2.1 x 50mm，1.7μm

       柱溫: 45 ?C

       流速: 0.5 mL/min

       流動(dòng)相A: 含有0.1%甲酸的水溶液

       流動(dòng)相B: 含有0.1%甲酸的乙腈溶液

       運(yùn)行時(shí)間: 4 min

       進(jìn)樣量: 1 μL

       質(zhì)譜條件

       質(zhì)譜系統(tǒng): Xevo TQ-S Micro

       電離模式: ESI+

       電噴霧電壓: 3.5 kv

       脫溶劑氣溫度: 500 ?C

       離子源溫度: 150 ?C

       脫溶劑氣流速: 1000 L/hr

       錐孔氣流速: 70 L/hr

       樣品制備

       樣品處理流程參照SN/T 2327-2009執(zhí)行。

       取生雞蛋煮熟，冷卻后剝開并攪碎，作為待測(cè)樣品；

       準(zhǔn)確稱取樣品1.00g至50 mL離心管，加入標(biāo)準(zhǔn)品后攪拌并靜止1小時(shí)；準(zhǔn)確加入15 mL乙腈并漩渦1分鐘；轉(zhuǎn)移到離心機(jī)并10000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘；

       取5 mL上清液混入5 mL正己烷，漩渦1分鐘。10000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘；取適量下層乙腈溶液過0.45 μm濾膜，取濾液1 mL上LC-MS/MS測(cè)試

       實(shí)驗(yàn)結(jié)果

       回收率測(cè)試

       取雞蛋樣品進(jìn)行添加回收率測(cè)定，分別添加20.0 μg/kg和2.0 μg/kg兩個(gè)濃度水平。按所建立的方法進(jìn)行樣品處理及測(cè)定，空白基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線，外標(biāo)法定量。高、低添加水平的回收率分別為95.9%和68.1%。

       基質(zhì)匹配校準(zhǔn)曲線及重現(xiàn)性

       用空白基質(zhì)配置斑蝥黃標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性范圍0.01-10.0 μg/L，標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)試重復(fù)性，每個(gè)濃度點(diǎn)重復(fù)測(cè)試9次，線性相關(guān)系數(shù)r2=0.9994,標(biāo)準(zhǔn)曲線各點(diǎn)%Dev<20%， 符合定量要求。

       按本方法對(duì)隨機(jī)購(gòu)買市售雞蛋樣品進(jìn)行了檢測(cè)，檢出了含量0.70 μg/kg的斑蝥黃。

       實(shí)驗(yàn)結(jié)論

       在標(biāo)準(zhǔn)SN/T 2327-2009中使用ACQUITY UPLC接Quattro Premier XE質(zhì)譜檢測(cè)斑蝥黃的基礎(chǔ)上，使用ACQUITY UPLC I-Class系統(tǒng)連接Xevo TQ-S micro對(duì)方法進(jìn)行驗(yàn)證。證明了該方法在Waters更多設(shè)備上的適用性。

       采用液液萃取結(jié)合溶劑稀釋法對(duì)樣品進(jìn)行處理，無(wú)需氮吹，省時(shí)省力。Xevo TQ-S micro的高靈敏度保證了檢出結(jié)果的準(zhǔn)確性。

       ACQUITY UPLC I-Class超高效液相色譜運(yùn)行僅需時(shí)間4 min即可完成方法檢測(cè)，大大提升了檢測(cè)的效率。